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這是一種在現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室。它通過將PCR反應(yīng)所需的核心成分(引物、探針、dNTPs、酶、緩沖液等)預(yù)先分裝并凍干在八連管中,極大地簡(jiǎn)化了PCR操作流程。
一、什么是凍干PCR八連管?
顧名思義,它是兩個(gè)關(guān)鍵概念的結(jié)合:
八連管:8個(gè)并聯(lián)的0.2mL PCR管,帶有或可以不帶有 管蓋。便于同時(shí)處理多個(gè)樣本,兼容標(biāo)準(zhǔn)PCR儀和移液器。
凍:通過冷凍干燥技術(shù),將液態(tài)的PCR主混合物在低溫低壓下去除水分,形成常溫下穩(wěn)定的干粉或餅狀物,附著在管底。
用戶在使用時(shí),只需向每個(gè)管中加入模板DNA/RNA和無核酸酶水(或指定的復(fù)溶液),重懸混勻后即可上機(jī)運(yùn)行PCR。
二、核心優(yōu)勢(shì)與實(shí)驗(yàn)應(yīng)用場(chǎng)景
凍干PCR八連管的設(shè)計(jì)旨在解決傳統(tǒng)液態(tài)PCR試劑的一些痛點(diǎn),其應(yīng)用場(chǎng)景非常廣泛。
1. 簡(jiǎn)化操作,提高效率與一致性
應(yīng)用場(chǎng)景:高通量篩查、臨床批量檢測(cè)。
優(yōu)勢(shì):無需在冰上反復(fù)取用多種液態(tài)試劑(酶、引物、緩沖液等),避免了繁瑣的加樣步驟和由此帶來的誤差。實(shí)驗(yàn)人員只需進(jìn)行兩步操作:加模板、加水。這顯著減少了操作時(shí)間,降低了人為錯(cuò)誤和樣本間交叉污染的風(fēng)險(xiǎn),提高了結(jié)果的重復(fù)性和一致性。
2. 增強(qiáng)穩(wěn)定性,便于儲(chǔ)存與運(yùn)輸
應(yīng)用場(chǎng)景:資源有限地區(qū)、野外現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)、流行病學(xué)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查、家庭自測(cè)(需配套簡(jiǎn)單設(shè)備)。
優(yōu)勢(shì):液態(tài)PCR試劑中的酶通常對(duì)溫度敏感,需要嚴(yán)格的-20℃冷鏈運(yùn)輸和儲(chǔ)存。而凍干粉在常溫或4℃條件下即可長(zhǎng)期保持穩(wěn)定(通??煞€(wěn)定數(shù)月甚至數(shù)年),大大降低了對(duì)冷鏈的依賴,節(jié)省了能耗和成本,使得PCR技術(shù)可以更容易地推廣到基層實(shí)驗(yàn)室或現(xiàn)場(chǎng)。
3. 減少污染風(fēng)險(xiǎn)
應(yīng)用場(chǎng)景:傳染病檢測(cè)、任何對(duì)氣溶膠污染敏感的檢測(cè)。
優(yōu)勢(shì):凍干試劑呈固態(tài),幾乎不會(huì)產(chǎn)生氣溶膠。傳統(tǒng)的液態(tài)試劑配制過程(開蓋、移液等)容易產(chǎn)生攜帶核酸的氣溶膠,是實(shí)驗(yàn)室交叉污染的主要來源之一。使用預(yù)分裝的凍干管,極大地降低了這類污染風(fēng)險(xiǎn)。
4. 實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化
應(yīng)用場(chǎng)景:大型臨床檢驗(yàn)中心、第三方檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室、自動(dòng)化流水線。
優(yōu)勢(shì):每一管中的試劑含量都是精確預(yù)分裝的,確保了實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化。八連管的規(guī)整形態(tài)非常適合用于自動(dòng)化液體處理工作站,實(shí)現(xiàn)從加樣到上機(jī)的全自動(dòng)化,進(jìn)一步提升通量和準(zhǔn)確性。
5. 即時(shí)檢測(cè)應(yīng)用
應(yīng)用場(chǎng)景:醫(yī)院門診、疾控中心現(xiàn)場(chǎng)、海關(guān)口岸、動(dòng)物疫病防控。
優(yōu)勢(shì):配合便攜式實(shí)時(shí)熒光PCR儀,凍干PCR八連管可以組成一個(gè)完整的、快速部署的分子診斷解決方案。在收到樣本后,可在極短時(shí)間內(nèi)(通常只需幾分鐘準(zhǔn)備)啟動(dòng)PCR擴(kuò)增,實(shí)現(xiàn)“樣本進(jìn),結(jié)果出"的快速檢測(cè)。
三、典型實(shí)驗(yàn)流程(以RT-qPCR為例)
準(zhǔn)備:從4℃或室溫儲(chǔ)存條件下取出凍干PCR八連管,短暫離心使管壁可能附著的粉末沉于管底。
復(fù)溶:向每個(gè)反應(yīng)孔中加入規(guī)定體積的無核酸酶水(或廠家提供的緩沖液)進(jìn)行重懸。通常建議使用渦旋振蕩器或移液器輕輕吹打使其溶解。
加樣:向每個(gè)反應(yīng)孔中加入提取好的模板核酸(RNA或DNA)。
混勻:輕輕吹打或短暫渦旋混勻(注意避免產(chǎn)生過多氣泡),然后短暫離心收集液滴。
上機(jī)檢測(cè):將八連管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀中,運(yùn)行預(yù)設(shè)好的擴(kuò)增程序。
結(jié)果分析:程序結(jié)束后,儀器軟件會(huì)自動(dòng)分析熒光曲線,給出Ct值并判斷結(jié)果(陽性/陰性)。
四、注意事項(xiàng)
復(fù)溶體積:必須嚴(yán)格按照說明書加入準(zhǔn)確體積的復(fù)溶液,否則會(huì)改變反應(yīng)體系的最終濃度,影響反應(yīng)效率。
避免反復(fù)凍融:雖然凍干粉穩(wěn)定,但一旦復(fù)溶成液態(tài),其穩(wěn)定性就與普通PCR試劑相同,應(yīng)盡快使用,避免反復(fù)凍融。
儲(chǔ)存條件:盡管穩(wěn)定性增強(qiáng),仍需遵循廠家建議的儲(chǔ)存條件(如避光、防潮)。
模板質(zhì)量:模板核酸的質(zhì)量和純度仍然是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素。
注:以上資料僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),如需具體產(chǎn)品資料請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌商。
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